雖然PCR基因擴(kuò)增儀的生產(chǎn)廠家、型號很多,工作原理不盡相同,使用方法也不盡一致,但都具有向自動化和智能化發(fā)展的趨勢,這對于使用者來說比較方便,只要參考說明書輕輕觸動鍵鈕,輸入或改變擴(kuò)增程序、反應(yīng)時間、溫度等,置入擴(kuò)增樣品,PCR基因擴(kuò)增儀就會自動完成整個擴(kuò)增過程。
溫度控制是決定PCR反應(yīng)能否成功的關(guān)鍵,主要包括溫度的準(zhǔn)確性、均一性以及升降溫速度。對梯度基因擴(kuò)增儀來說,還必須考慮JS-G基因擴(kuò)增儀在梯度模式和標(biāo)準(zhǔn)模式下是否具有同樣的溫度特性。實(shí)時熒光定量JS-G基因擴(kuò)增儀均有熒光檢測系統(tǒng),主要包括激發(fā)光源和檢測器。簡便的人性化設(shè)計(jì)zui能滿足其需求。多樣化樣品基座設(shè)計(jì)、熱蓋等都使基因擴(kuò)增儀越來越人性化。
PCR基因擴(kuò)增儀為您分析不同的類型的儀器各有什么不同的特點(diǎn):
1、金屬板式實(shí)時定量基因擴(kuò)增儀,還可作為普通PCR儀使用,有的甚至帶梯度功能,可容納的樣本量大,無需特殊耗材,但溫度均一性欠佳,有邊緣效應(yīng),標(biāo)準(zhǔn)曲線的反應(yīng)條件難以做到與樣品*一致。
2、離心式實(shí)時定量基因擴(kuò)增儀的PCR擴(kuò)增樣品槽被設(shè)計(jì)為離心轉(zhuǎn)子,溫度均一性好,但可容納樣品量少,有的需用特殊毛細(xì)管作樣品管,增加了使用成本,也不帶梯度功能。
3、各孔獨(dú)立控溫的定量基因擴(kuò)增儀的不同樣品槽分別擁有獨(dú)立的智能升降溫模塊,各孔獨(dú)立控溫,適合多指標(biāo)快速檢測,可實(shí)現(xiàn)任意梯度反應(yīng),但上樣不如傳統(tǒng)方法方便,而且需要*的扁平反應(yīng)管,使用成本較高。
PCR基因擴(kuò)增儀適用于分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品工業(yè)、司法科學(xué)、生物技術(shù)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)、臨床診斷、流行病學(xué)、遺傳學(xué)、基因芯片、基因檢測、基因克隆、基因表達(dá)等領(lǐng)域以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)為特征的、以檢測DNA/RNA為目的的各種病原體檢測及基因分析。
根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測的標(biāo)準(zhǔn),JS-G基因擴(kuò)增儀分為普通基因擴(kuò)增儀,梯度基因擴(kuò)增儀,原位基因擴(kuò)增儀,實(shí)時熒光定量基因擴(kuò)增儀四類,下面我們就來看下他們具體的特色:
1、普通的JS-G基因擴(kuò)增儀:把一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個特定退火溫度的PCR儀,叫傳統(tǒng)的PCR儀,也叫普通PCR儀。如果要做不同的退火溫度需要多次運(yùn)行。主要是做簡單的,對目的基因退火溫度的擴(kuò)增。該儀器主要應(yīng)用于科研研究,教學(xué),醫(yī)學(xué)臨床,檢驗(yàn)檢疫等機(jī)構(gòu)。
2、梯度JS-G基因擴(kuò)增儀:把一次性pcr擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常12種溫度梯度,這樣的儀器就叫梯度PCR儀。因?yàn)楸粩U(kuò)增的不同DNA片段,其zui適退火溫度不同,通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增,從而一次性PCR擴(kuò)增,就可以篩選出表達(dá)量高的zui適退火溫度,進(jìn)行有效的擴(kuò)增。
3、原位JS-G基因擴(kuò)增儀:用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細(xì)胞內(nèi)基因擴(kuò)增儀,如病源基因在細(xì)胞的位置或目的基因在細(xì)胞內(nèi)的作用位置等。是保持細(xì)胞或組織的完整性,使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細(xì)胞中,在細(xì)胞的靶DNA所在的位置上進(jìn)行基因擴(kuò)增,不但可以檢測到靶DNA,又能標(biāo)出靶序列在細(xì)胞內(nèi)的位置,于分子和細(xì)胞水平上研究疾病的發(fā)病機(jī)理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有重大的實(shí)用價值。
4、實(shí)時熒光定量PCR基因擴(kuò)增儀:在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加一個熒光信號采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),就成了熒光定量PCR儀。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR儀擴(kuò)增原理相同,只是PCR擴(kuò)增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實(shí)時采集信號連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)得出量化的實(shí)時結(jié)果輸出。把這PCR儀叫做實(shí)時熒光定量PCR儀。
PCR基因擴(kuò)增儀維護(hù)注意事項(xiàng):
1、注意本機(jī)的使用環(huán)境條件和電源;
2、機(jī)蓋開關(guān)要輕,以防損壞蓋鎖;
3、嚴(yán)禁工作時打開機(jī)蓋;
4、定期用中性肥皂水清洗樣品槽,嚴(yán)禁使用強(qiáng)堿、有機(jī)溶液和高濃度酒精擦洗;
5、有故障時請有專業(yè)知識的維修人員或廠家技術(shù)人員維修。
PCR基因擴(kuò)增儀的類型,pcr基因擴(kuò)增儀的設(shè)計(jì)均按照dna變性、復(fù)性和延伸三個環(huán)節(jié)以及溫度均恒、傳導(dǎo)快和升降溫迅速等原則,結(jié)合傳感技術(shù)、微電子技術(shù)和電子計(jì)算機(jī)等技術(shù)發(fā)展而成的自動化和智能化的儀器設(shè)備,下面巴玖僅從保溫和變溫的角度介紹幾類pcr儀的原理。