凝膠成像分析儀在發(fā)生化學(xué)反應(yīng)時產(chǎn)生的一種光輻射現(xiàn)象,根據(jù)其特性,在生物學(xué)領(lǐng)域中常被用來進(jìn)行蛋白質(zhì)與DNA的檢測。化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)相較具有高靈敏度、無材料損耗、自動曝光過程、電子圖片存檔等眾多優(yōu)勢,但是,由于系統(tǒng)是依靠HRP或AP等特定的酶與底物結(jié)合來運作,因此所產(chǎn)生的光輻射比較微弱,相應(yīng)的光信號的采集過程難度就大了不少。所以,想要獲取到如此微弱的化學(xué)發(fā)光,就需要配置性能較高的CCD相機(jī)。
衡量CCD性能高低的指標(biāo),有分辨率、靈敏度、信噪比、動態(tài)范圍等,而凝膠成像系統(tǒng)就需要CCD具有以高分辨率、高靈敏度、低噪聲、寬動態(tài)范圍等為主要參數(shù)的基本特性。也就是說,想要通過化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)獲取清晰的圖像并進(jìn)行的分析的話,CCD在選擇上一定要滿足相關(guān)特性。
高分辨率是重要的特性要求,是指在一定單位時間內(nèi),所獲取的像素數(shù)目。而像素數(shù)目又是判定CCD好壞的重要指標(biāo),指的是CCD可以分辨到的感光元件,一般來說,像素越高,感光性越好,成像也就越清晰。但是,并不是像素數(shù)目多了,就一定是性能好的CCD,還要看像素的大小。這是因為如果大小不變,數(shù)目增多的話,其排列就會變得密集,那么像素之間就越容易出現(xiàn)電流干擾,產(chǎn)生電流噪點。
凝膠成像分析儀是通過紫外或白光光源對樣品進(jìn)行光激發(fā),由科學(xué)級CCD相機(jī)和專業(yè)的大光圈鏡頭對樣品所發(fā)射的光通過特定波長濾光片后進(jìn)行捕捉,從而進(jìn)行成像。凝膠成像主要可應(yīng)用于蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的分離純化結(jié)果作定性分析以及其他紫外或白光激發(fā)的樣品分析。
1、凝膠成像:可以對蛋白質(zhì)凝膠,DNA凝膠,RNA凝膠樣品進(jìn)行圖象采集,并可應(yīng)用成像系統(tǒng)自帶軟件直接進(jìn)行分析。染色的核酸凝膠銀染的蛋白質(zhì)凝膠等。
2、全自動數(shù)碼凝膠成像分析系統(tǒng)其他樣品成像:96孔板、培養(yǎng)皿等白光或自然光可激發(fā)的樣品成像。用成像系統(tǒng)成像由于焦距、光圈等參數(shù)可固定,圖像質(zhì)量更加均一,要優(yōu)于手持相機(jī)拍攝。
3、半定量分析:根據(jù)分子量標(biāo)準(zhǔn)的分子量和濃度,可以對核酸或蛋白質(zhì)的分子量、濃度、相對含量等進(jìn)行半定量分析。該分析主要是根據(jù)條帶的位置和條帶亮度與分子量標(biāo)準(zhǔn)的位置及亮度比對得到的結(jié)果,該結(jié)果要遠(yuǎn)準(zhǔn)確于肉眼的觀察和估計。另外,有些系統(tǒng)可進(jìn)行遺傳樹分析和VNTRs等分,可以便于在遺傳學(xué)水平上進(jìn)行分析。
4、菌落計數(shù)分析:可以對培養(yǎng)皿上的菌落進(jìn)行計數(shù),可以降低手動計數(shù)帶來的誤差。
5、點雜交分析:微孔板或膜上的雜交反應(yīng)進(jìn)行定性和半定量分析,可以根據(jù)閾值分辨出陰性和陽性雜交,并計算出濃度值。
6、全自動數(shù)碼凝膠成像分析系統(tǒng)測量分析:對樣品的長度進(jìn)行測量,適用于生物樣本的長度測量,抗生素效價的計算等等。
現(xiàn)在凝膠成像分析儀的選擇大致來看有這樣的趨勢:
1、專業(yè)研究分子生物學(xué)的在以前已經(jīng)裝配了普通凝膠成像分析系統(tǒng),這兩年有一些有遠(yuǎn)見教授或者研究到化學(xué)發(fā)光成像和多色熒光成像方向的實驗室已經(jīng)裝配了,化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng),多色熒光成像分析系統(tǒng),這有部分已經(jīng)有一定的數(shù)量了。極少數(shù)實驗室也裝配了多功能活體成像分析系統(tǒng),這在全國是屬于極少數(shù)的。
2、第二類是研究和生物相關(guān)的交叉和邊緣學(xué)科實驗室,才剛剛裝配普通凝膠成像分析系統(tǒng),并且這部分老師對分子影像成像分析系統(tǒng)還沒有完整的了解和系統(tǒng)的操作,他們選擇子影像成像分析系統(tǒng)更沒主意。
3、從現(xiàn)在大的發(fā)展方向來看,專業(yè)研究分子生物學(xué)的已經(jīng)在普通凝膠成像分析系統(tǒng)的基礎(chǔ)之上開始向化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng),多色熒光成像分析系統(tǒng)走的趨勢,但是在這中間有一個很大的問題就是絕大多數(shù)的老師很想向化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng),多色熒光成像分析系統(tǒng),做并且他們有很多已經(jīng)做到這個方向,但是這些老師沒有接觸過過化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng),多色熒光成像分析系統(tǒng),對他們的具體的功能和操作都沒有足夠的知識,特別是在熒光染料的選擇上面和實際的動物及各種樣本的處理方面有一定得難度。
4、基于上面的三點所以分子影像成像分析系統(tǒng)的選擇應(yīng)該遵循以下這樣的幾個原則。
A、分子影像成像分析系統(tǒng)的廠商的產(chǎn)品線要擁有普通凝膠成像分析系。
凝膠成像分析儀多色熒光成像分析系統(tǒng),多功能活體成像分析系統(tǒng)這些比較長的產(chǎn)品線,這樣可以給老師足夠的選擇空間。并且可以從普通凝膠成像分析系統(tǒng)可以升級到化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)的空間,從化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)升級到多色熒光成像分析系統(tǒng)的空間,從多色熒光成像分析系統(tǒng)升級到多功能活體成像分析系統(tǒng)的空間。
B、選擇的品牌應(yīng)該擁有自主生產(chǎn)分子影像成像分析系統(tǒng)的主要零部件的能力,特別是CCD的生產(chǎn),濾光鏡片和多功能軟件這些主要部分,這樣可以為客戶以后的維修零部件的價格較低和質(zhì)量的保證,同時這樣的廠家整套儀器的價位也可以有所降低。
C、凝膠成像分析儀的品牌同時擁有分子影像成像系統(tǒng)和數(shù)字成像系統(tǒng)生產(chǎn)能力,或者有分子影像成像系統(tǒng)和數(shù)字成像系統(tǒng)相結(jié)合的產(chǎn)品,因為現(xiàn)在的數(shù)字成像系統(tǒng)已經(jīng)在各個領(lǐng)域應(yīng)用非常的廣泛,以后分子影像成像系統(tǒng)和數(shù)字成像系統(tǒng)相結(jié)合一定是一個新的趨勢。
D、凝膠成像分析儀的品牌選擇,特別是在選擇化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng),多色熒光成像分析系統(tǒng),多功能活體成像分析系統(tǒng)的時候,特別要注意品牌是否有強(qiáng)大的才可以,因為現(xiàn)在化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng),多色熒光成像分析系統(tǒng),多功能活體成像分析系統(tǒng)還沒有普遍,這些方面的知識和技術(shù)還不普遍,特別是,多功能活體成像分析系統(tǒng)更是如此。